HOLINESTERAZA (engl. cholinesterase), enzim iz roda hidrolaza (acetilholin acilhidrolaza, EC 3.1.1.8), koji katalizuje reakciju acetil (ili drugi acil) holin + H2O Û holin + acetat (ili drugi anjon karboksilne kiseline). Ovim nazivom ranije je obuhvatana i acetilholinesteraza (EC 3.1.1.7). Enzim ima umerenu supstratnu specifičnost i hidrolizuje butiril estre mnogo brže nego propionil ili acetil estre. Kao supstrati mogu da se koriste i benzoilholin i tioholin estri. Enzimsku aktivnost inhibiraju alkaloidi kao što su fizostigmin, prostigmin i morfin, kao i niz organofosfatnih jedinjenja kao što su diizopropilfluorofosfat, paration, sarin itd. Postoji više od se-dam izoenzimskih oblika, od kojih su najvažnije one genetske varijante sa neznatnom enzimskom aktivnošću, koje imaju povećanu rezistenciju na inhibiciju sa dibu-kainom ili fluoridom. S obzirom da se holinesteraza sintetizuje u jetri, određivanje aktivnosti ovog enzima značajno je i kod pacijenta sa oboljenjima jetre.
